Jenis Fase Diam TLC dan Aplikasi Penggunaannya

Lapisan fase diam (plate TLC) saat ini sudah banyak beredar dari berbagai merk sepeti Merck, Macherey-Nagel, Whatman atau Analtech. Di Indonesia yang beredar luas di pasaran adalah produk dari Merck.

Produk dari produsen diatas juga mempunyai nama dan nomor catalog tersendiri. Dengan demikian untuk sistem dokumentasi sesuai GMP/GLP (Good Manufacturing Practices/ Good Laboratory Practice), tidak ada tumpang tindih penomoran catalog diseluruh dunia. Klasifikasi fase diam TLC adalah berdasar pada bahan penjerap, ukuran butir, indicator fluoresensi, karakteristik, dll.

Beberapa jenis plate TLC/KLT yang tersedia secara komersial beserta contoh penggunaannya terinci pada table dibawah. Didalam memilih perangkat fase diam untuk KLT, tidak dapat diasumsikan bahwa fase diam yang identik dari produsen yang berbeda akan memberikan pemisahan yang sama. Akan tetapi secara umum berbeda meskipun tidak signifikan. Oleh karena itu, nama dagang dan nomer item yang dipergunakan untuk publikasi harus tetap tertulis jelas karena sangat penting untuk memperoleh produk dan data, terutama juga untuk metode validasi.

Contoh pemisahan seperti gambar dibawah ini yaitu pemisahan minyak peppermint pada pelat KLT yang berbeda spesifikasi penjerap, dalam catalog yang berbeda.

Identifikasi minyak peppermint dari berbagai produsen

Spot no. 1–5 menggunakan TLC silica gel 60 F254, Merck Article No. 5715

Spot no. 6–8 menggunakan Durasil-25 UV254, Macherey-Nagel Article No. 812008
Spot senyawa :
Spot 1 : mentol, menthone 

Spot 2 : menthyl asetat, menthofuran

Spot 3-8 : minyak peppermint dari produsen yang berbeda

Pada gambar menunjukkan jarak pengembangan yang sama, variasi efisiensi pemisahan terlihat jelas dan nila hRf yang diperoleh berbeda untuk senyawa yang sama.

Inilah daftar fase diam KLT beserta penggunaannya :

Bahan penjerap (Sorbent)	Prinsip kromatografi	Tipe penggunaan
Aluminum oxide	kromatografi adsorpsi karena interaksi kutub	Alkaloid, steroid, terpen, alifatik, aromatik
Selulosa tidak dimodifikasi	Partisi kromatografi karena interaksi kutub	Asam amino dan asam karboksilat serta karbohidrat
Selulosa asetat	Tergantung pada kadar asetil transisi dari normal fase ke fase terbalik kromatografi	Anthraquinon, antioksidan, polisiklik aromatik, asam karboksilat, nitrophenol, pemanis
Selulosa pertukaran ion	Pertukaran anion	Asam amino, peptida, enzim, nucleic acids constituents (Nukleotida, nukleosida), dll
Fase campuran antara selulosa DEAE dan selulosa SDM	Pertukaran ion	Mono-dan oligonukleotida dalam asam nukleat hydrolyzates
Pertukaran ion Ionex	Pertukaran anion dan kation	asam amino, asam nukleat hydrolyzates, gula amino, antibiotik, anorganik fosfat, kation
Kieselguhr	Umumnya untuk pemisahan fase terbalik	Aflatoksin, herbisida, Tetrasiklin
Partisi poliamida	Kromatografi karena interaksi kutub (misalnya Ikatan hidrogen)	Senyawa fenolik dan polifenolik alam
Silika murni, tidak dimodifikasi
Standar dan nano silika gel	Kromatografi fase normal	Yang paling sering aplikasi dari semua fase diam KLT
Kemurnian tinggi silika gel 60		aflatoxin
Silika gel G, diresapi dengan amonium sulfat		Surfaktan, lipid
Silika gel 60, diabsorbsi dengan kafein untuk PAH penentuan	Transfer kompleks	Polisiklik Aromatik Hidrokarbon (PAH) acc. untuk spesifikasi air minum Jerman (TVO)
Dimodifikasi secara kimia lapisan: CHIRalplate	Pemisahan enantiomer	Asam amino kiral, asam hidroksikarboksilat dan senyawa lainnya yang dapat membentuk khelat kompleks dengan Cu (II) ion
Lapisan Modifikasi Ciano	Fase CN Normal dan terbalik	Pestisida, fenol, pengawet, steroid
Modifikasi DIOL		Steroid , hormon
Amino-modified layer NH2	Pertukaran anion, kromatografi fase normal dan terbalik	Nukleotida, pestisida, fenol, turunan purin, steroid, vitamin, asam, sulfonat, asam karboksilat, xanthin
RP-2, RP-8, RP-18		Senyawa nonpolar (lipid, aromatic)
Silika gel 60 silanized		Polar zat (bahan aktif farmasi, baik asam maupun basa)
RP-18 W/UV254	Kromatografi fase normal dan terbalik	Aminophenol, barbiturat, pengawet, nukleobasa, PAH, steroid, tetrasiklin, ftalat
LiChrospher ® Si 60	Kromatografi fase normal	Aminophenol, barbiturat, pengawet, nukleobasa, PAH, steroid, tetrasiklin, ftalat
Campuran aluminium oksida / asetilasi selulosa	Fase normal dan terbalik	Polisiklik Aromatik Hidrokarbon (PAH)
Selulosa / silika gel	Fase normal dan terbalik	Bahan pengawet
Kieselguhr / silika gel	Kromatografi fase normal, penurunan daya absorbsi	Karbohidrat, antioksidan, steroid, senyawa pengembang fotografi

Yang ini jenis fase diam KLT produk baru :

Bahan penjerap (Sorbent)	Prinsip kromatografi	Tipe penggunaan
Adamant® (Macherey-Nagel) Lux® (Merck)	Peningkatan jumlah indikator fluoresensi	Universal
UTLC (Merck)	Ultra thin monolithic silica gel	Steroid, azepams, asam amino, ftalat dan fenol
ProteoChrom® (Merck)	a) HPTLC silica gel 60 F254s, 20 × 10 cm glass plate b) HPTLC cellulose, 10 × 10 cm aluminium sheet	Asam amino, peptida Asam amino, peptide KLT 2-D
HPTLC Premium Purity Plate (Merck)	Dibungkus khusus foil berlapis plastik	Semua aplikasi farmakope